在定量分析方法中,由于很多物质在紫外光-可见光区有吸收,可以借助比色法进行测定,因此光度分析法广泛的应用于地质、冶金、化工、医学、食品、制药及环境监测等行业。在光度分析法中,比色皿的选择、使用及维护对分析结果有着重要的影响,下面我们就从这些角度来聊聊比色皿。
一、比色皿的分类
比色皿的制造工艺有两种,一种是粘合剂粘合而成,另一种是高温熔融而成。比色皿的材料通常来源于石英、熔凝硅石和光学玻璃。玻璃比色皿对紫外线几乎全部吸收,吸光度非常大。而石英比色皿的吸光度则小得多。常用比色的形状有方形、矩形和圆筒形,容量一般为几毫升,也有用于少量试样的微型或超微型毛细管皿。另外还有高、低温恒比色皿。
二、比色血的选择
分析波长在350nm以上时可选用玻璃或石英比色,在350nm以下时须使用石英比色。比色皿有不同的光程长度,一常用的有0.5、1、2、3、125px,选择哪种光程长度的比色应视分析样品的吸光度而定。当比色液的颜色较淡时,应选用光程长度较大的如50px、75px比色皿;当比色液的颜色较深时,应选用光程长度较小的如12.5px、25px比色皿,以使所测溶液的吸光度在0.1~0.7之间。
三、比色皿的校正
比色皿有方向性。有些比色皿上标有方向标记,使用时必须注意。无方向标记的比色皿应予以校正。校正时要先确定方向并作好标记以减少测定误差。比色皿的校正方法是:将纯净的蒸馆水注入比色皿中,把其中吸收最小的比色皿的吸光度置为零,并以此为基准,测出其它比色皿的相对吸光度。测定比色液时,应将其吸光度减去比色皿的吸光度。同一组比色相互间的差异应小于测定误差。在测定同一溶液时,吸光度差值应小于0.5%,否则应对差值进行校正。
比色皿的光程长度也需校正,校正时可将吸光度约为0.4的溶液分别注入校正皿和具有准确光程长度的标准比色皿中,测定吸光度。以标准比色的吸光度为1.00,求出校正比色皿吸光度的相对值作为该比色皿的校正系数。测定比色液时,可将所测得的吸光度乘以该皿的校正系数以得到实际吸光度值。
四、比色皿的使用与维护
拿取比色皿时不得接触透光面,否则指纹、油污会弄脏窗口而使比色皿改变透光性能。使用比色皿时应于测试前将待测液倒入比色皿洗涤三次(注意不要产生气泡)。比色外的水和溶液可先用滤纸吸干,再用镜头纸或软绸布擦拭,不能在电炉或火焰上加热干燥。比色皿在光路中应垂直于光束方向,以减少反射损失。
每次使用完毕的比色皿,一般先用自来水冲洗再用蒸馆水冲洗三次倒置于干净的滤纸上晾干,然后存放于比色皿盒中。如果比色皿被有机物污染宜用盐酸-乙醇(1+2)混合液浸洗,也可用相应的有机溶剂浸泡洗涤。如:油脂污染可用石油醚浸洗,铬天青显色剂污染可用硝酸(1+2)浸洗等,比色血不可用碱液洗涤,也不能用硬布毛刷刷洗。
含有能腐蚀玻璃物质的溶液,如氢氟酸氟化物的高浓度溶液,不可放入比色中。含氟离子浓度低的溶液也不宜在血中久置。比色质地较脆石英皿尤甚,使用时动作要轻,切勿摔碰。
五、比色皿的材质选择
比色皿选择或使用不当,造成无法测量或引起测量误差的现象在实验中经常出现,这一问题又很容易被实验入员忽视。
紫外区的定义为190-400nm,石英比色皿可用于190-900nm,玻璃比色皿用于360-900nm,紫外区的一定要用石英比色皿,必须配置紫外/可见分光光度计,否则低波长段不能分析。对于一般的非光学专业入员,用眼睛是不能分开石英比色皿和玻璃比色皿的。但两者硬度差别很大。石英比色皿比玻璃比色皿硬度大(绝对值)几十倍,如果把两个对磨,石英比色皿将很少被磨损,而玻璃比色皿磨损非常大。
由于石英比色皿的透光范围从0.12-4.5微米(120-450nm),广泛的谱段范围内没有任何吸收峰。而玻璃比色皿只有0.4—4微米(400-4000nm),且有许多离子吸收峰。所以,石英比色皿要比玻璃比色皿*的多,化验数据更准确、更可靠。
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